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dna損傷檢測(cè)試劑盒的使用流程來(lái)學(xué)習(xí)下吧

更新時(shí)間:2022-10-13   點(diǎn)擊次數(shù):516次
  dna損傷檢測(cè)試劑盒的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)包括板內(nèi)差異、板間差異、批間差異、重復(fù)性、特異性、散布反應(yīng)、回收率等。如果經(jīng)常進(jìn)行ELISA檢測(cè),建議使用同一個(gè)試劑盒。制造商,以盡可能保證數(shù)據(jù)的可重復(fù)性(當(dāng)然,條件是測(cè)試條件的一致性)。至于用于科研的ELISA試劑盒,不同廠家使用的抗體對(duì)、酶和底物、生產(chǎn)技術(shù)和開(kāi)發(fā)實(shí)力不同,不同廠家的試劑盒測(cè)得的數(shù)據(jù)也會(huì)不同。
  dna損傷檢測(cè)試劑盒的使用流程:
  1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在第、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在第、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從第孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180ng/L,120ng/L,60ng/L,30ng/L,15ng/L)。
  2、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
  3、溫育:用封板膜封板后置38℃溫育30分鐘。
  4、配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
  5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  6、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
  7、溫育:操作同3。
  8、洗滌:操作同5。
  9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
  11、測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
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