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PUREfrex®1.0無細(xì)胞蛋白合成試劑盒組分及使用方法

更新時(shí)間:2025-04-28   點(diǎn)擊次數(shù):190次

PUREfrex®1.0于2011年推出,是基于PURE system開發(fā)的無細(xì)胞蛋白合成試劑盒,由轉(zhuǎn)錄、翻譯、能量再生所需的蛋白和核糖體組成。        

PUREfrex®使用流程.png

圖2.PUREfrex®使用流程

 

PUREfrex®1.0使用方法(僅供參考):

以20ul反應(yīng)體系為例,如果需要擴(kuò)大體積可以等比例增加對(duì)應(yīng)試劑。

1. 在室溫或37℃下保溫1分鐘使溶液I完-全融解,然后在冰上冷卻。

2. 在冰上融化溶液II和溶液III。

3. 將溶液I,溶液II和溶液III 渦旋后簡(jiǎn)短離心收集管底內(nèi)容物。

4. 根據(jù)下列表格配置反應(yīng)液,每1kb加入模板DNA 1-3ng/ul。

Water

8-X μL

Solution I

10μL

Solution II

1μL

Solution III

1μL

Template DNA

X μL

總體積

20ul

5. 在37°C的heat block或水浴中反應(yīng) 2~4 h,合成蛋白。

6. 分析合成蛋白。通過SDS-PAGE驗(yàn)證時(shí),請(qǐng)用水稀釋反應(yīng)液后進(jìn)行電泳。

試劑盒組分1.0.png

試劑盒組分:

組分名稱

組分內(nèi)容

保存溫度

Solution I

Amino acids,   NTPs, tRNAs and substrates for enzymes etc.

-20℃

Solution II

Proteins in 30 %   glycerol buffer

-20℃/-80℃

Solution III

Ribosome (20 μM)

-80℃

DHFR DNA

PCR product   containing a gene encoding dihydrofolate reductase (DHFR) from E.coli as a   positive control. (20 ng/μL)

-20℃

請(qǐng)注意:1.在打開試劑盒之前請(qǐng)將試劑盒儲(chǔ)存在-80°C的溫度下。2.溶液II和溶液III避免反復(fù)凍融。

 

產(chǎn)品信息:

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

GFK-PF001-0.25-EX

 

PUREfrex®1.0

1 x 250 µl

GFK-PF001-2ML-EX

2 ml

GFK-PF001-10ML-EX

5 x 2 ml

 

除了以上目錄產(chǎn)品外,Cosmo Bio也能根據(jù)客戶的需求提供定制的PUREfrex®1.0。PUREfrex®1.0的成分信息是公開的,您可以根據(jù)PUREfrex®1.0設(shè)計(jì)定制試劑盒。

 

PUREfrex®1.0組分

PUREfrex®1.0 Solution I   (Buffer, Salts, Substrates)組分

Hepes-KOH pH 7.6

Potassium glutamate

Magnesium acetate

Spermidine

Dithiothreitol

10-Formyl-tetrahydrofolate

4 NTPs

20 Amino acids

Creatine phoshate

tRNA mixture

 

PUREfrex®1.0 Solution II   (Proteins)組分

20 Aminoacyl-tRNA   synthetases (ARS)

Methionyl-tRNA   transformylase (MTF)

3 Initiation factors (IF1,   IF2, IF3)

3 Elongation factors (EF-Tu,   EF-Ts, EF-G)

3 Release factors (RF1, RF2,   RF3)

Ribosome recycling factor   (RRF)

T7 RNA polymerase

Nucleoside diphosphate   kinase (NDK)

Adenylate kinase (ADK,   myokinase)

Ceatine kinase (CK)

Pyrophosphatase (PPiase)

 

PUREfrex®1.0   Solution III組分

Ribosome

 

定制應(yīng)用舉例

(-)RF1

用于通過如下圖所示的琥珀抑制合成含有非天然氨基酸的蛋白質(zhì)。

(-)T7 RNA polymerase

可用于檢測(cè)其他RNA聚合酶性能,如大腸桿菌RNA聚合酶。

(-)特異性氨基酸和(或)20種氨酰tRNA合成酶

用于合成含非天然氨基酸或少于20個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。

 

琥珀抑制途徑合成含有非天然氨基酸的蛋白質(zhì)示意圖.png

圖3.琥珀抑制途徑合成含有非天然氨基酸的蛋白質(zhì)示意圖

 

當(dāng)您的蛋白質(zhì)需要分子伴侶的幫助或形成二硫鍵以形成正確的構(gòu)象時(shí),只需向PUREfrex®1.0中添加補(bǔ)充試劑即可。

 

分子伴侶-幫助蛋白正確折疊,合成可溶形式蛋白質(zhì)

產(chǎn)品貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

GFK-PF003-0.5-EX

DnaK Mix

500 µl Equivalents

GFK-PF003-10ML-EX

DnaK Mix

5 x 2 ml Equivalents

GFK-PF004-0.5-EX

GroE Mix

500 µl Equivalents

GFK-PF004-10ML-EX

GroE Mix

5 x 2 ml Equivalents

 

幫助形成二硫鍵的添加物

產(chǎn)品貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

GFK-PF005-0.5-EX

DsbC Set

500 µl Equivalents

GFK-PF005-10ML-EX

DsbC Set

5 x 2 ml Equivalents

GFK-PF006-0.5-EX

PDI Set

500 µl Equivalents

GFK-PF006-10ML-EX

PDI Set

5 x 2 ml Equivalents

 

 


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